时间：2023-06-19 16:29:12
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[摘要] 该研究采用高效液相色谱法建立了市售小柴胡颗粒的指纹图谱，并对不同厂家和同一厂家不同批次小柴胡颗粒进行了指纹图谱研究，首次对其中7种主要指标性成分进行了指认，为小柴胡颗粒的质量评价提供了一种较为全面的分析手段。
[关键词] 小柴胡颗粒；高效液相色谱法；指纹图谱；质量评价
小柴胡颗粒是根据东汉张仲景《伤寒论》中的小柴胡汤方加工制成的现代中成药，是中医和解剂的代表方，由柴胡、黄芩、党参、甘草、姜半夏、大枣和生姜7味药组成，具有解表散热、疏肝和胃的功效[1]。现代药理研究表明，该方还具有较好的抗炎、保肝利胆、调节免疫、抗肿瘤等作用，在临床上应用广泛[2-3]。小柴胡颗粒生产厂家众多，质量参差不齐，仅针对某个或几个指标成分进行定性、定量分析并不能对其质量进行有效地控制，而特征指纹图谱能较全面直观地表征出中药复方制剂中所含化学成分的种类和数量，进而反映该制剂内在的质量[4]。因此本研究建立了市售小柴胡颗粒的HPLC指纹图谱研究方法，对小柴胡颗粒中7 种主要指标性成分进行同时分析测定，并用相似度评价软件和SPSS软件，对其指纹图谱的特征峰数据进行了相似度计算和系统聚类分析，评价了不同厂家和同厂家不同批次市售小柴胡颗粒的质量，旨在为小柴胡颗粒的质量评价提供一种较为全面的分析手段。
1 材料
Agilent 1260高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；G1311C 1260Quat四元泵（美国安捷伦）；G1329B 1260ALS进样器（美国安捷伦）；G1314B 1260VWD VL检测器（美国安捷伦）；Rev.B.04.03[52]液相色谱工作站（美国安捷伦）；BT 125D天平（赛多利斯）；KH5200E型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。
本试验收集了11个不同厂家市售小柴胡颗粒，购自全国各地零售药店。样品来源和批号见表1，2。将11个厂家样品随机编号，依次记为S1，S2，S3，S4，S5，S6，S7，S8，S9，S10，S11。
黄芩苷（baicalin，批号110715-201117）、黄芩素（baicalein，批号111595-201105）、汉黄芩素（wogonin，批号111514-201016）、甘草苷（liquiritin，批号111610-201106）、甘草酸铵（ammonium glycyrrhizinate，批号110731-201116）、柴胡皂苷A（saikosaponin A，批号110777-201108）对照品均购于中国食品药品检定研究院；汉黄芩苷（wogonoside，批号111014）对照品购于四川省维克奇生物科技有限公司；乙腈、甲醇为色谱纯（美国Fisher），磷酸为分析纯（天津市光复科技发展有限公司），水为娃哈哈纯净水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Agilent Zorbax SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱，程序见表3，流速0.8 mL·min1；检测波长210 nm；柱温30 ℃；进样量10 μL。所有组分于120 min内被检测完。
2.2 混合对照品溶液的制备
分别取甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、甘草酸铵、柴胡皂苷A和汉黄芩素对照品适量精密称定，置10 mL量瓶中，用甲醇定容，制成质量浓度分别为0.015 3，0.507，0.104，0.021 5，0.050 6，0.011 8，0.011 5 g·L-1的混合对照溶液，过0.45 μm的微孔滤膜，取续滤液作为混合对照品溶液，备用。
2.3 供试品溶液的制备
取同一厂家同一批次小柴胡颗粒适量，研成细粉，取约5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验 取S1厂家小柴胡颗粒样品1份，按2.3项下方法制备供试品溶液，分别准确吸取同一供试品溶液10 μL，连续进样6次，按2.1项下条件测定，记录指纹图谱，以黄芩苷色谱峰（指纹图谱中14号峰）为内参比峰，计算指纹图谱中各共有峰的相对保留时间和相对峰面积比值，结果表明所有共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%，表明仪器精密度良好。
2.4.2 稳定性试验 取S1厂家小柴胡颗粒样品1份，按2.3项下方法制备供试品溶液，分别在0，3，12，24，48 h，按2.1项下条件进样测定，记录指纹图谱，以黄芩苷色谱峰（指纹图谱中14号峰）为内参比峰，计算指纹图谱中各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明所有共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%，表明样品在48 h内稳定。
2.4.3 重复性试验 取S1厂家小柴胡颗粒样品，按2.3项下方法制备供试品溶液，平行制备6份，各吸取10 μL，按2.1项下条件测定，记录指纹图谱，以黄芩苷色谱峰（指纹图谱中14号峰）为内参比峰，计算指纹图谱中各共有峰的相对保留时间和相对峰面积，结果表明所有共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3.0%，表明重复性良好。
2.5 小柴胡颗粒指纹图谱的测定及技术参数
2.5.1 不同厂家小柴胡颗粒的指纹图谱测定及共有峰标定 取上述11个厂家小柴胡颗粒样品，按2.3项下方法制备供试品溶液，分别准确吸取混合对照品溶液及11个小柴胡颗粒样品的供试品溶液各10 μL，按2.1项下条件测定，记录指纹图谱。
将图谱数据导入指纹图谱相似性评价软件分析，以S2厂家小柴胡颗粒图谱为参照图谱，进行多点校正，匹配色谱峰，以中位数法生成对照图谱，结果见图1～3。
经与对照品鉴定，21.065，49.573，90.143，98.369，102.766，104.913，110.005 min出峰分别为甘草苷（8号峰）、黄芩苷（14号峰）、汉黄芩苷（19号峰）、黄芩素（22号峰）、甘草酸铵（25号峰）、柴胡皂苷A（26号峰）、汉黄芩素（27号峰）。其中，黄芩苷（14号峰）分离度较好，峰面积较大且稳定，故选其为参照峰（S）。以黄芩苷为参照峰的HPLC指纹图谱确定共有峰29个，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积值，结果表明，11批不同生产厂家小柴胡颗粒相对保留时间的RSD较小（0～0.78%），而相对峰面积的RSD较大，说明小柴胡颗粒指纹图谱中主要峰群的直观特征基本一致，但各成分含量有较大的区别。
2.5.2 同厂家不同批次小柴胡颗粒的指纹图谱测定 取上述S3和S11厂家各5个批次小柴胡颗粒样品，按2.3项下方法制备供试品溶液，并按2.1项下条件测定，记录指纹图谱，见图4，5。
2.5.3 相似度评价 采用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A版）》评价2个厂家不同批次小柴胡颗粒的指纹图谱，分别以S2，批号111249，110903图谱为参照谱，以中位数法生成对照指纹图谱，计算样品与共有模式之间的相似度，评价样品质量，见表4，5。
2.5.4 样品色谱数据的系统聚类分析 运用SPSS软件，对所得高效液相指纹图谱数据进行聚类分析。采用组件均连法（average linkage between groups），利用夹角余弦（cosine）作为样品的测度，聚类分析将不同厂家样品分为3类。其中厂家S3，S4，S11分在第I类，厂家S1，S2，S5，S6，S7，S8，S9分在第II类，S10分在第III类，见图6。由结果可知，不同厂家的小柴胡颗粒样品存在不同程度的质量差异。
3 讨论
由于党参、姜半夏、大枣和生姜4味药材在该提取方法和色谱检测条件下很难被检测出来，所以在小柴胡颗粒指纹图谱上没有体现这几个药材的相关信息。
不同厂家和同一厂家不同批次的小柴胡颗粒样品指纹图谱相似度均大于0.9，表明各样品相似度较好。不同厂家样品之间相对含量RSD有差异，甚至某些组分差异较大，可能是由于不同生产厂家生产工艺参数、生产设备性能、对中药材有效成分提取率的差异，造成了产品成分含量的差别，但各厂家样品的指纹图谱整体面貌相似，所建立的指纹图谱相对保留时间重复性良好，相似度较高，可以作为鉴别小柴胡颗粒质量的指标之一。
聚类分析结果显示，不同厂家被聚为3类，说明厂家间质量有所差异，原因可能是相似度的计算是按各色谱峰的峰面积中位数生成共有模式，其分析的是每张指纹图谱的各个色谱峰；而聚类分析的计算是利用组件均连法，采用夹角余弦测定的，其分析的是各个指纹图谱的共有峰，所以2种分析结果有所区别，但相似度结果中S10样品相似度相对较低，在聚类分析结果中被单独聚为第III类，说明2种分析结果大体相一致。
[参考文献]
[1] 中国药典. 一部[S]. 2010：509.
[2] 谢乐.小柴胡汤的药理研究及该方在发热性疾病中的应用[J]. 现代医药卫生， 2007， 23（19）： 2930.
[3] 姜雪，李佳. 小柴胡汤的临床应用与药理研究[J]. 长春中医学院学报， 2006， 22（1）： 81.
[4] 王晓军，张春玲. 指纹图谱技术在中药质量控制中的应用[J]. 甘肃中医学院学报， 2004， 21（3）： 44.
Study on fingerprint of Xiaochaihu granules sold in the market
YAN Lei， LIN Long-fei， ZHANG Hui， DANG Xiao-fang， NI Jian*
（School of Chinese Material Medica， Beijing University of Traditional Chinese Medicine， Beijing 100102， China）
[Abstract] To establish a fingerprint of Xiaochaihu granules sold in the market with HPLC method， and study fingerprints of Xiaochaihu granules produced by different manufacturers and in different batches of the same manufacturer. Seven major index components were identified for the first time. The established method provided an all-around analysis on the quality assessment of Xiaochaihu granules.
大美容概念
美容、理疗、食疗、心理疏导“四位一体”
大美容虽依托原有美容会所发展，但不能完全按照模式来操作，其发展和壮大的基础是专业服务：美容师进行护肤指导；健康专家为亚健康人群诊断症状，提出诊疗方案；营养师根据顾客体制、症状，配制膳食；心理咨询师负责心理辅导、咨询。
现在，已有不少先行者在探索这一新业态，有些会所集美容、理疗、食疗、心理疏导四位一体，打造亚健康人群的健康新概念，涉及项目繁多，例如涵盖的阿胶文化、藏药文化、燕窝文化、虫草文化、汤文化令人目不暇接；虹膜检测、基因检测、经络检测、血压检测、血糖检测、女性乳腺检测等体贴入微；健康补给、食疗、理疗、孕婴等项目应有尽有。除了全面性的“大美容”概念会所，更为普遍的是将以上项目中的两三个进行整合的。比如，美容会所下增设养生泡浴会所，规定凡是美容会所会员达到一定积分后就可以免费享受养生泡浴一次；再比如美容会所旗下开设茗茶馆，将花草茶养生文化贯穿其中，与美容会所的健康理念相得益彰。
除此之外，有关资料显示，心理处于亚健康的人比身体亚健康的人要多得多。而在我国，有很大一部分人还不太重视心理亚健康的防治，这块市场潜力非常大。因此，如若大美容项目能在这方面有所突破，或可走出一片新天地来。
大美容形象
“六化”带来新气象
“六化”包括形象专业化、装饰温馨化、经营多元化、营运标准化、服务专业化、管理科学化。
1.形象专业化
为什么有些并不需要去打针吃药的亚健康症状的顾客，会更相信医院而不相信美容会所呢？因为大多数医院的硬件设施都非常专业，人员感觉更加专业，环境也简单整洁，仪器使用也很标准，使得美容会所在大部分的印象中相差甚远。造成这个原因，是因为许多美容会所经营者虽然在店面的装潢上有投入，但很多美容会所显得光线暗淡、店内色彩凌乱，加上胡乱摆放的仪器，根本无法吸引顾客踏进美容会所，这是为何很多人都愿意去医院解决亚健康问题的原因之一。
作为想走大美容路线的经营者，可以考虑将美容会所的形象专业化，如用灯光配合商品――白色光线配合高科技美容仪器、进口美容产品、药妆等，显现科技感的特征；而中医药油、芳香精油等，则用红色背景作映衬，外加射灯照射，突出其档次不凡。另外，店内除了播放音乐，还可以不间断地播放健康小知识、小常识等，但要将音量调得适中，给顾客轻松、愉快的感受。
2.装饰温馨化
要营造一种温馨、亲切的气氛，商业味不可过重。比如，许多美容会所的墙上都是产品广告、美容会所的企业文化等宣传，没有从顾客的角度来设计，也没给顾客开设一块休闲的场地，导致顾客进到美容会所就觉得被产品轰炸的头疼。这里建议，美容会所在装饰时应给顾客家一样的感觉，营造温馨气氛，不妨在醒目的地方做一些健康提醒，给缺乏健康意识的顾客带来科普知识；开辟一个休闲区，顾客平时路过会所，就算不做疗程，也可以坐下来看看杂志、喝喝茶、听听音乐；将咨询区设置得私密些，保护顾客隐私等。
一家以养生、亚健康调理为主营项目的会所管理者说：“我们在内饰这方面充分的借鉴了医院，例如医院门口处设有无障碍区倾斜坡道，以确保坐轮椅或腿脚不方便的人士轻松入店。对健康调理中心来说，如果接待的顾客都是年纪稍长的，至少该将台阶铺设的平缓些、楼梯灯光稍明亮些。来我们这里调理的顾客，有些患有慢性关节炎的，他们的病痛发作起来最需要人安慰。所以，我们规定当顾客进入店内，一定会微笑接待，给他们心理上的安慰。”这家店内随处可见为顾客考虑的用心布置，例如咨询台，为了确保从外面看不到咨询顾客，采取独立隔断间的形式装修。此外，为了让美容师在提供咨询服务时，不与顾客正面对视，特将咨询桌装修成45度角的形式，使美容师从这个角度看向顾客的目光更柔和。
3.经营多元化
除了经营常规面护、身体等项目外，还可以涉及个人护理用品、药妆、孕婴童产品、功能性饮料等。这里推荐一家纤体会所的做法，感兴趣的美容会所经营者不妨学习一下，“我们的店内不太爱陈设套盒，所有的套盒都在无尘的恒温仓库保管，这一方面考虑到卫生性，另一方面也给顾客尊贵的体验。因为是做纤体的，店内我们会陈设一些健康零食，如进口杏仁等，以及一些个人护理用品，如卫生巾等。我们的顾客常常说，最好能开个专门的健康便利店，这个建议我们正在考虑。”
4.营运标准化
要有一套标准化的大美容营运模式，不少美容会所的营运模式重复改变，经营者在标准上摇摆不定，导致模式执行者在实际营运中产生逆反心理。在国内，营运标准化比较到位的会所各地都有很多，不管是其店面招牌、橱窗形象、店内设施设备、商品陈设等方面，还是店员的仪容仪表、接待用语、顾客回访、采购管理、财务管理、GSP管理等都非常标准，可以达到上百家门店以同样的标准营运。
5.服务专业化
员工的专业化和大美容提供的产品、服务要相适应，做大美容，首先必须让专业的人做专业的事，合理配备美容师、心理咨询师、营养师等；其次，要在专业化服务的基础上，根据顾客的自身情况开展个性化服务，如上门美容、配送养生膳食、提供个人电子保养手册、季节性养生建议等。比如，一家美容会所不仅开办了养生食疗中心，向顾客提供养生咨询服务和排毒蔬果套餐，同时还提供营养师的上门养生汤粥烹饪法指导。此外，该美容会所还在冬季滋补季节，在国医大师的指导下，提供冬季膏方养生搭配。每到一个节气，制订出该节气时令应该注意的养生事项，在美容会所的接待室公布，同时在网络以主页形式信息情报。
6.管理科学化
